黑曲霉金属蛋白酶的克隆表达与性质鉴定

摘要

在毕赤酵母中克隆表达黑曲霉CGMCC 3.7193中一个疑似金属蛋白酶基因MPase,分离纯化后对重组酶MPase进行理化特征分析。结果显示,纯化后的MPase:比酶活达到1859.2 U/mg,最适反应温度35℃,最适反应pH7.0;在低于40℃,pH5.0~8.0之间稳定;偏好水解大豆分离蛋白,K_(m)和V_(max)分别为3.9 mg/mL、892.7 mg/(mL·min);金属离子Co^(2+)和Zn^(2+)对其有激活作用,Cu^(2+)和Fe^(2+)对其有抑制作用;酶解大豆分离蛋白水解度可达到14.7%,并且产物分子量大小均匀;可耐受5000 mmol/L NaCl,在50℃保持30 min即可完全失活。其酶学特征表明:MPase在食品工业尤其在发酵食品加工中具有较大应用潜力。