高密度发酵产酪氨酸酚裂解酶及催化合成L-DOPA

摘要

为了提高酪氨酸酚裂解酶(tyrosine phenol-lyase,TPL)的表达量和酶活,使之更高效地催化合成左旋多巴(3,4-2-dihydroxylphenylalanine,L-DOPA),在摇瓶优化的基础上,研究了溶氧控制策略、补料策略、诱导温度和诱导策略对菌体生长、TPL酶活和L-DOPA产量的影响.结果 表明,在5L发酵罐中25℃诱导条件下,采用DO-stat补料策略控制罐内溶氧的体积分数为20％,菌体浓度、TPL酶活和催化合成L-DOPA产量较分批培养分别提高了17.9％、57.7％和27.8％.诱导后控制溶氧体积分数在40％相比于20％更利于TPL的表达,酶活相比于20％的DO的提高了33.8％.通过优化起始诱导时间,在菌体生长的对数前期(OD600=7)诱导,细胞浓度提高到51.2 g/L,酶活提高到2.43 U/mL,L-DOPA产量为56.58 g/L,较分批培养分别提高了64.1％、170％和209.2％.初步实现了重组大肠杆菌高密度培养生产TPL,为L-DOPA产业化研究奠定了基础.