侧流层析-重组酶聚合酶扩增技术快速检测土拉弗朗西斯菌

摘要

目的 利用侧流层析-重组酶聚合酶扩增(LF-RPA)技术建立快速、敏感、特异的土拉弗朗西斯菌(土拉菌)检测方法.方法 基于土拉菌特异性基因(tul4)设计重组聚合酶恒温扩增方法的引物及探针,优化反应时间和温度,同时评价该方法的灵敏度及特异性,并通过模拟血液样品评估此方法的实用性.结果 该方法最佳反应条件是40℃,20 min,可检测核酸浓度最低为20 fg/μl,与实时荧光定量PCR(qPCR)方法相近,且不与7种非土拉菌发生交叉反应.土拉菌模拟样本最低检测浓度为460 CFU/ml.结论 该检测方法操作简单,特异性良好,敏感度高且无需大型精密实验设备,在临床及现场检测土拉菌中具有应用前景.