弓形虫VEG株ROP16蛋白对THP-1细胞免疫调节及机制研究

摘要

为了探究弓形虫VEG株ROP16蛋白在THP-1细胞中的表达及对其免疫反应的影响和相关机制,本研究利用慢病毒构建过表达ROP16(overEep-ROP16)载体,空载体(overEep-NC)为对照,通过转染THP-1细胞构建稳转细胞株,对其荧光蛋白表达情况、ROP16在THP-1细胞中的表达及定位进行检测;通过RT-PCR检测炎性因子IL-1β、IL-18、TNF-α、IL-10、IL-12 mRNA相对表达水平;Western-blot方法检测炎性小体NLRP3、Caspase-1蛋白与信号通路蛋白STAT3、pTyr705-STAT3的表达水平。结果显示,构建的过表达ROP16重组慢病毒转染THP-1细胞后可观察到强绿色荧光,在THP-1细胞中rop16基因在mRNA与蛋白水平均成功表达且该蛋白定位于THP-1细胞核;与对照组相比,过表达组促炎细胞因子IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA表达水平上调(P0.05)。上述结果表明,构建的过表达ROP16重组慢病毒稳转染至THP-1细胞内并表达蛋白,表达的蛋白定位于THP-1细胞核内,该蛋白能激活NLRP3炎性小体促发炎症的发生并通过磷酸化STAT3 Tyr705调控抗炎作用。