基于体外巨噬细胞极化作用进行异种血管组织脱细胞评价的实验研究

摘要

目的通过体外巨噬细胞极化诱导的实验方法,客观评价异种血管组织进行除垢剂脱细胞处理后的纯度和免疫原性。方法对新鲜牛主动脉采用3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸内盐[3-(3-Chol⁃amidopropyl)dimethylammonium)-1-propanesulfonate,CHAPS]和十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,SDS)的双除垢剂脱细胞方法进行脱细胞处理,其中SDS脱细胞时间设置为24 h和36 h两组,定量检测脱细胞处理后组织材料DNA浓度。进一步将脱细胞血管基质材料消化为溶液状态,在体外对SD大鼠来源的巨噬细胞进行刺激诱导。采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析巨噬细胞表面标记物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD80、CD206和CD163,以及分泌的细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的基因表达量。结果脱细胞时间为36 h的一组基质材料DNA浓度50 ng/mg,诱导巨噬细胞向M1型极化,促炎症因子表达增加。结论体外诱导巨噬细胞极化的方法,明显区别出血管组织除垢剂脱细胞处理残存DNA是否存在免疫刺激作用,可以考虑作为评价洗脱效果的客观指标之一。