单增李斯特菌双元调控系统lmo1060/lmo1061缺失株的构建及其抗酸应激能力

摘要

为了探明双元调控系统Lmo1060/Lmo1061是否影响单增李斯特菌(LM)的抗应激作用及致病性,本研究以LM 10403S为亲本株,通过同源重组技术构建了Δlmo1060/lmo1061缺失株。应激存活试验结果表明,lmo1060/lmo1061缺失显著增强LM在酸应激(pH=2.5)条件下的存活率,但不影响该菌在10%NaCl和10 mmol/L H;O;中的存活能力。绿色荧光蛋白(GFP)报告基因筛选显示,lmo1060/lmo1061缺失不影响谷氨酸脱羧酶系统gadD1/gadT1和gadD3报告基因的表达,但显著上调gadT2/gadD2报告基因的表达。Western blot结果证实,缺失株Δlmo1060/lmo1061中GadD2蛋白水平显著高于亲本株,回补株CΔlmo1060/lmo1061中GadD2蛋白水平与亲本株则无显著性差异。小鼠毒力试验显示,缺失株Δlmo1060/lmo1061与亲本株感染24 h后在小鼠肝脏和脾脏中的载菌量并无显著差异。研究表明,双元调控系统Lmo1060/Lmo1061可能感应环境pH值变化,并通过调控gadT2/gadD2表达影响LM的抗酸应激作用。