牛支原体recA基因的克隆表达及重组recA的DNA重组酶活性分析

摘要

为了确定牛支原体recA是否也具有介导DNA重组的活性,从牛支原体PG45菌株基因组中克隆recA基因片段,构建至原核表达质粒pET-28a中,摸索表达条件,采用Ni-NTA树脂纯化而获得纯度较高的重组recA蛋白,并进行DNA重组酶活性试验。结果表明,重组蛋白以可溶性表达的最优条件为16℃、800μmol/L IPTG、诱导30 h;而DNA重组酶活性试验结果表明,重组的牛支原体recA蛋白具有介导同源DNA重组酶活性。这将为构建牛支原体高效的定向遗传操作系统、探究recA基因在牛支原体DNA损伤修复中的生物学功能和机制等奠定基础。