猪博卡病毒VP1蛋白的多克隆抗体制备及初步应用

摘要

旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus, PBoV)VP1蛋白的多克隆抗体。利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。纯化后的目的蛋白与ISA206佐剂混合后通过背部皮下免疫日本大耳白兔,3次加强免疫后,收集兔血清,利用间接ELISA、Western blot与间接免疫荧光(IFA)的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果显示,成功获得PBoV VP1蛋白目的基因,利用原核表达系统大量表达了VP1蛋白,并制备多克隆抗体;ELISA滴定结果显示,该抗体在稀释至12 800倍时反应性依旧良好;Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体可与VP1蛋白条带发生特异性结合;将PBoV感染的猪肠道组织制备冰冻切片,IFA检测结果表明,该抗体与PBoV具有良好的反应性。上述结果表明,本研究成功制备了针对PBoV VP1蛋白的兔多克隆抗体,为深入研究PBoV的VP1蛋白生物学功能奠定了一定物质基础。