T7 cDNA噬菌体展示文库筛选乙型肝炎病毒前S2蛋白结合蛋白

摘要

目的以乙型肝炎病毒前S2蛋白(HBVPre-S2)为靶蛋白,寻找该蛋白相应的结合蛋白。方法应用噬菌体表面展示技术,以纯化的HBV前S2蛋白为固相筛选蛋白,用正常人肝细胞的噬菌体T7cDNA文库进行5轮生物筛选,经噬斑PCR,对筛选克隆进行DNA序列分析,将推断的氨基酸序列在蛋白质库中进行搜索,自GenBank中获得与HBVPre-S2有结合作用蛋白的cDNA和基因组的全长序列,并用ELISA验证筛选的结合蛋白。结果噬菌体经过5轮生物富集后,将随机筛选的200个噬斑裂解液做PCR,得到120个插入片段长短不一的克隆,ELISA证实获得43个阳性克隆。将其PCR产物序列测定后进行同源搜索,初步确定30个人体肝脏中固有的与乙型肝炎病毒前S2蛋白结合的蛋白,其中含细胞色素P450Ⅰ类A型亚基克隆2个、3个PI-3激酶相关激酶SMG-1同类蛋白、2个细胞生长抑制蛋白42,1个膜联蛋白A11转录变异体、3个转录激活因子5、2个α酸性糖蛋白、5个未知功能蛋白等。结论应用T7cDNA噬菌体表面展示技术和生物信息学方法筛选并验证了HBVPre-S2蛋白结合蛋白,为进一步研究Pre-S2蛋白的生物学功能提供新了思路。