腺病毒介导的CD-TK融合基因联合GCV和/或5-Fc对人膀胱癌细胞的杀伤作用

摘要

目的:研究腺病毒介导的CD-TK融合基因联合前体药物对人膀胱癌细胞的杀伤作用。方法:利用含有CD-TK融合基因及绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷腺病毒转染人膀胱癌细胞株T-24细胞,GFP表达可作为转染是否成功的间接标志,PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测转染后细胞CD及TK基因序列的表达情况。用丙氧鸟苷(GCV)和/或5氟胞嘧啶(5-Fc),作为前体药物,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其对转染后T-24细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果:腺病毒在体外能高效转染T-24细胞,72h转染效率可接近100%。GCV和/或5-Fc均能有效杀伤转染后膀胱癌细胞,给予相同浓度前体药物时,联合用药组显示出较强的肿瘤杀伤作用。0.5mg/mlGCV、0.1mg/ml5-Fc和GCV+5-Fc作用于转染后T-24细胞72h细胞生存率分别为23.30%、20.63%、10.10%。旁观者效应杀伤实验表明5-Fc组较GCV旁观者效应明显,而联合用药组显示出更强的旁观者效应。利用Hoechst-PI双染色法检测经前体药物作用后转染细胞,各组均可见凋亡细胞,但联合用药组凋亡细胞较单一用药组多。结论:CD-TK融合基因联合应用GCV和/或5-Fc能有效杀伤膀胱肿瘤细胞,并存在较强的旁观者效应,其杀伤机制可能与凋亡相关,为适用于人膀胱癌的治疗提供一条新思路。