RNA干扰供体大鼠库普弗细胞B7分子表达对受体大鼠淋巴细胞激活的影响

摘要

目的：观察RNA干扰供体Lewis大鼠库普弗细胞（KC）B7分子表达对受体BN大鼠淋巴细胞增殖和生成IL-2的影响．方法：分离培养供体Lewis大鼠KC，设计大鼠B7分子的干扰片段，构建并鉴定含B7干扰片段的RNA干扰载体Psilencer 3．1H1-Neo-B7，将RNA干扰载体转染供体大鼠的KC，转染后采用RT-PCR方法检测KC上B7分子表达的变化．将转染后的KC分为3组，对照组（A）；空载体组（B）；RNA干扰B7表达组（C）．分离培养受体BN大鼠的淋巴细胞，将以上各组细胞分别与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养，采用MTT法检测各组淋巴细胞的增殖情况．采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-2的含量．结果：分离培养的供体Lewis大鼠KC得率为5×10^7，活率大于98％．构建的RNA干扰载体经酶切和测序鉴定正确．RNA干扰KC后其B7的表达降低了22％（P〈0．01）．将干扰B7表达的KC与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养，与对照组相比，受体BN大鼠的淋巴细胞增殖降低了49％（P〈0．01），细胞培养上清中IL-2的分泌量下降了67％（P〈0．01）．结论：RNA干扰供体Lewis大鼠KC B7分子的表达可明显抑制受体BN大鼠淋巴细胞的增殖和IL-2的产生．