人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征

摘要

人胎肝cDNA文库FLD4585克隆可能编码一种造血相关的转录因子，本文旨在从22周孕龄人胎肝中获得其编码基因的全长cDNA序列，分析其编码蛋白的功能域、基因组结构、染色体定位、亚细胞定位及表达谱特征。采用5′RACE方法获得FLD4585克隆全长；生物信息学方法确定hBKLF基因结构、染色体定位及功能域特征；GFP融合蛋白技术确定hBKLF亚细胞定位；Northern杂交、RT-PCR、Western印迹方法分析其表达谱。结果获得了Fld4585克隆编码的hBKLFcDNA全长序列，它含1810bp，编码345个氨基酸，与小鼠BKLF同源，C端含3个特征性C2H2结构的锌指，是KLF转录因子家族的新成员。HBKLF基因跨越33kb，含6个外显子和5个内含子，位于4号染色体4p15.2-p16.1。GFP-hBKLF融合蛋白在COS-7细胞中呈细小点状分布于核内，核仁区无分布。HBKLF含有两个转录本，大小为4.4kb-7.5kb和1.35kb-2.4kb。大转录本在成人及胎儿组织广泛表达，小转录本在外周血白细胞、肝脏和骨髓表达量最高，红系和粒系细胞均表达hBKLF。HBKLF表达量随肝脏发育成熟而下降，随红系、粒系成熟而升高。以上研究提示hBKLF可能是一种在体内广泛发挥作用的转录因子，在造血的调控中可能有重要作用。