自噬在视网膜母细胞瘤Y79细胞顺铂耐药中的作用及其机制

摘要

目的研究自噬在视网膜母细胞瘤Y79细胞顺铂耐药中的作用及其机制。方法 CCK-8法检测细胞IC_(50);将Y79细胞随机分为对照组(Control)、顺铂组(Cis)和顺铂联合应用自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤组(Cis+3-MA),Western blot法、细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)和透射电子显微镜观察细胞自噬情况;CCK-8法检测顺铂对细胞的抑制率变化,Annexin V/PI双染流式法检测细胞凋亡变化,q-PCR检测相关耐药基因转录水平,Fluo-4 AM钙离子荧光探针染色检测细胞内钙离子变化,Western blot法检测CaMKK2、p-AMPK、mTORC1、LC3Ⅱ的表达。结果视网膜母细胞瘤Y79细胞在顺铂的诱导下发生自噬,加入自噬阻断剂3-MA后细胞自噬水平下调。与顺铂组相比,Cis+3-MA组顺铂抑制率增加,凋亡率增加,相关耐药基因转录水平下调。细胞加入顺铂后,细胞内钙离子水平增加,CaMKK2、p-AMPK、LC3Ⅱ表达上调,mTORC1表达下调。结论顺铂诱导肿瘤细胞产生的自噬对视网膜母细胞瘤细胞Y79耐药起保护作用,抑制自噬可以改善肿瘤细胞对顺铂的耐药性。顺铂可能是通过Ca^(2+)激活CaMKK2/AMPK/mTORC1通路诱导Y79细胞自噬。