单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒E糖蛋白的研究

摘要

本文探讨了用JEV—E McAb制备亲和层析柱纯化E糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而用NP40、去氧胆酸钠、Tri—ton X-100处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5、0.05M二乙胺洗脱剂对E的生物活性影响较少,而3M KSCN对E的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb2F_2和mC_3亲和层析柱纯化E糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30～40%及30～60%,蛋白收获量分别为0.33～1.26mg及0.21～0.66mg,相对HA比活性分别提高3～8倍及8～30倍;经SDS—PAGE考马斯亮兰染色,显示一条带,分子量相当于E糖蛋白;纯化的E糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。