高亲和力单克隆抗体CL15识别的表位

摘要

鉴定抗磷脂综合征患者来源的抗纤溶酶单抗CL15所识别的结构域，并运用生物信息学和计算机辅助设计对CL15进行表位分析。使用分子克隆的方法克隆并纯化了纤溶酶的结构域，ELISA方法检测CL15对天然纤溶酶和微小纤溶酶的结合能力。根据CL15的抗体的互补区（CDR）的已知序列，在PBD蛋白库中进行同源比较，获得了同源性较高的单抗IMFA的Fab段的晶状结构，用计算机软件把CL15的CDR区序列优化进入IMFA后，根据结构域的空间结构与CL15进行对接。结果，高亲和力结合纤溶酶的单抗CL15识别纤溶酶的结构域，通过对CL15的晶体结构的同源模建，计算机模拟与微小纤溶酶结合，CL15在纤溶酶的酶活性区的606～789中的部分氨基酸序列有明显的相互作用，存在表位为空问构象，能将纤溶酶的丝氨酸活化中心屏蔽。CL15能识别微小纤溶酶，抗原表位在纤溶酶的丝氨酸的活性中心区域。CL15能阻断丝氨酸蛋白酶的活性中心的关键氨基酸，降低纤溶酶的活性，可能是最终导致抗磷脂综合征病人血栓形成的原因之一。