CTAB法制备超螺旋质粒DNA

摘要

研究了基因治疗用载体质粒DNA的一种非色谱的大规模纯化方法—CTAB沉淀法,并对其进行了工艺优化．首先采用高纯过滤介质CelPure去除大量杂质,并利用CTAB浓度梯度溶液研究了不同形式DNA(超螺旋质粒DNA、切口质粒DNA、线性质粒DNA、染色体DNA)沉淀能力的差异,选择性地从蛋白质、RNA及其他形式DNA中提取超螺旋质粒DNA．针对含有pcDNA3的DH5α菌株,确定CTAB完全沉淀超螺旋质粒DNA的浓度为2．0g/L,由NaCl对不同沉淀的溶解能力,确定溶解沉淀的最优盐浓度为0．75 mol/L．用此方法得到的超螺旋质粒DNA的纯度达90％以上,收率为78．94％．RNA、蛋白质残量以及内毒素均符合药品质量标准要求．CTAB对质粒DNA的沉淀效果与质粒DNA的初始浓度有关,并且超螺旋质粒DNA浓度的降低与CTAB的添加量呈一定的线性关系．超螺旋质粒的分子量越小越不易被分离,并且结构特性比分子量在分离过程中更据主导作用．