乌头简单序列重复区间扩增条件的优化

摘要

目的保证乌头ISSR-PCR的稳定性、提高对乌头遗传多样性,亲缘关系分析、种质鉴定的可靠性。方法收集西南地区23个乌头材料,以Mg2+,dNTP,引物和聚合酶建立L9(34)正交设计,并同时考察模板和甲酰胺浓度及退火温度,建立适宜的ISSR-PCR体系。结果以Mg2+2.0 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L、rTaq酶1U、模板1.5 ng/μl、甲酰胺2%及退火温度(Tm-3)℃的ISSR反应体系最优。结论实验建立的ISSR-PCR体系反应稳定,能用于乌头的ISSR分析。