胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶-磷酸核糖基转移酶融合基因/5-氟胞嘧啶治疗鼻咽癌的实验研究

摘要

目的研究胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖基转移酶融合基因／5-氟胞嘧啶（fusion cytosine deaminaseuracil phosphoribosyl transferase gene／5-Flurocy-tosine，FCU／5-FC）对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应以及对鼻咽癌移植瘤生长的抑制作用。方法构建表达质粒载体pcDNA3．1（-）CMVe·Egr-1·FCU，BamH Ⅰ酶切鉴定重组质粒，分析FCU基因和融合启动子CMVe·Egr-1的序列。电穿孔法将重组质粒转染CNE-2细胞，300μg／ml-600μg／mlG418筛选14天获得稳定表达FCU基因的CNE-2细胞，RT—PCR鉴定FCU基因的表达。以转染空白载体pcDNA3．1（-）的CNE-2细胞为对照，MTT法观察5-FC对表达FCU基因的CNE-2细胞生长的抑制作用，考察FCU基因的细胞旁杀效应。5×10^6的CNE-2细胞接种裸鼠右腋下，建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，12天后将裸鼠随机分成3组：CU组，CU＋PBS组和CU＋5-FC组，观察不同处理对移植瘤生长的抑制作用。结果酶切和序列分析证明重组质粒含完整的FCU基因和Egr-1启动子的核心序列，RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出330bp的预期片段。表达FCU基因的CNE-2细胞在5-FC干预下，生长受到抑制。随着表达FCU基因的细胞比例增加，细胞存活率相应地下降。CU组，CU＋PBS组移植瘤体积与CU＋5-FC组有显著性差异（P〈0．05）。结论表达FCU基因的CNE-2细胞可以被5-FC杀伤，FCU／5-FC系统抑制了移植瘤生长，为治疗鼻咽癌提供了新的策略。