负荷内源性高甘油三酯血症患者血清极低密度和低密度脂蛋白对HepG2细胞载脂蛋白CⅢ受体功能的影响

摘要

目的　探讨载脂蛋白CⅢ受体在内源性高甘油三酯血症发病机制中的作用。材料与方法　人肝癌细胞系HepG2 (本室保种 ) ;RPMI 16 40培养基 (GIBCO) ;L 谷氨酰胺 (EMK进口分装 ) ;新生小牛血清 (成都华西生化制品厂 ) ;青霉素G钠、硫酸链霉素 (华北制药厂 ) ;胰蛋白酶 (1∶2 5 0 ,Difco进口分装 ) ;Na12 5I(Amersham) ;纯化人载脂蛋白CⅢ ,由本室傅强博士制备 ;低温乙醇法制备人血浆白蛋白组份FⅡ+FⅢ (由成都蜀阳制药厂提供 ) ;甘油三酯试剂盒和胆固醇试剂盒均购自北京中生公司 ;人血清白蛋白(Takara) ;血浆密度标准缓冲液 (PDB ,含 0 .9%NaCl,0 .0 1%NaN3 ,10mmol LTris HCl及 1mmol LEDTA ,pH 7.4 ) ;其它试剂均为国产分析纯。人肝癌细胞系HepG2细胞按常规方法培养。取高甘油三酯血症患者 [甘油三酯≥ 5 .93mmol L (35 0mg dL) ,总胆固醇≤ 6 .74mmol L (2 6 0mg dL) ]及血脂正常者 [甘油三酯≤ 1.7mmol L(15 0mg dL) ,总胆固醇≤ 6 .74mmol L (2 6 0mg dL) ]空腹血清各 2 0mL(均为多人的混合血清 ) ,按略加修改的张林华和刘秉文等的一次性密度梯度超速离心法操作。甘油三酯和胆固醇含量用北京中生公司酶法试剂盒测定 ;受体分析以12 5I标记的人载脂蛋白CⅢ为配体 ,利用放射性配体结合分析法 ,分别观察负?