高分辨率荧光显微成像技术在光敏剂亚细胞定位研究中的应用

摘要

目的　探讨应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统研究血卟啉单甲醚 (hematoporphrinmonornethyletherHMME)亚细胞分布的可行性。方法　传代培养鼠肺毛细血管内皮细胞 ,与HMME共同孵育 2 4h ,选择 4种特异性细胞器荧光探针Rhodamine 1 2 3、Luciferyellow、DiOC6(3)和BODIPY分别标记细胞内线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体 ,应用由荧光显微镜及电感耦合器组成的高分辨率荧光显微成像系统 ,分别采集细胞内HMME与细胞器探针的荧光图像。通过计算机图像处理 ,设计采用细胞器 细胞荧光强度比值法对HMME进行亚细胞定位。结果　在参数m的不同取值点 ,HMME在 4种细胞器区域与细胞平均荧光光强比值 (J1 /J2 )的差异有显著性 ,且各细胞器区域J1 /J2 大小排列顺序都为 :高尔基体 >线粒体 >内质网 >溶酶体 ;随参数m的增高 ,HMME在 4种细胞器区域平均光强比值呈下降趋势 ;细胞核区荧光微弱。结论　高分辨率荧光显微成像系统能对HMME及 4种细胞器探针进行荧光成像 ;应用此系统结合荧光定量分析法能对荧光效率极低的光敏剂进行较精确的亚细胞定位研究。