溶癌水泡性口炎病毒体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

摘要

目的:研究一株实验室减毒水泡性口炎病毒(VSV)对HepG2细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的作用机制.方法:首先将水泡性口炎病毒以1.0感染复数(MOI)的接种密度感染HepG2细胞,同时设接种相同体积培养液的Mock感染组,在不同时间点收集细胞,MTT法检测细胞增殖活性;AO/EB结合Hoechst/PI染色观察细胞凋亡形态学变化;AnnexinV-FITC/PI双染法检测早期凋亡细胞数目;PI染色结合细胞周期分析sub-G1凋亡峰值;JC-1染色测定细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)水平;比色法检测caspase-3,caspase-8及caspase-9的活性变化.结果:减毒VSV感染HepG2细胞后,随着感染时间的增加,HepG2细胞存活率明显降低.VSV感染HepG2细胞24h后,早期凋亡细胞数高于Mock感染组(26.46%±6.01%vs4.86%±2.28%,t=-5.817,P<0.01);sub-G1峰细胞数高于Mock感染组(14.07%±3.83%vs3.99%±1.36%,t=-4.293,P<0.05);HepG2细胞线粒体跨膜电位(ΔΨm)明显降低(t=-4.586,P<0.05);caspase-9和caspase-3的活性显著升高(P<0.05或P<0.01).结论:人肝癌细胞HepG2是VSV敏感细胞株,VSV感染HepG2导致细胞线粒体△Ψm下降,激活caspase-9进而活化下游caspase-3,最终通过内源性线粒体通路诱导细胞凋亡.