苹果凹果类病毒(ADFVd)的检测与序列分析

摘要

采集新疆焉耆地区的老果园的苹果树枝条、叶片和韧皮部,利用自行设计的方法提取总RNA,根据GenBank中的X99487序列设计引物,利用RT-PCR技术扩增出苹果凹果类病毒(ADFVd)特异条带,通过回收克隆测序,结果表明,获得的7条序列,有5条同源性很高,均在98%以上,另外2条的同源性只有85%左右,这7条序列均已在GenBank中登录(登录号:EU031497_EU031503)。在此基础上利用插入ADFVd目的DNA的质粒为模板,成功合成了地高辛标记的cDNA探针,该探针能很好地用于ADFVd的检测。同时利用原位RT-PCR技术,做了进一步检测,证明苹果叶片中有苹果凹果类病毒存在,主要分布在叶肉细胞的细胞核中。