人BMI-1基因真核表达载体构建及其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞中的表达

摘要

目的：构建人Bmi-1基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-Bmi-1，转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞中并检测其表达。方法：RT-PCR检测Bmi．1mRNA在乳腺癌细胞系MCF-7及MDA-MB-468细胞中的表达水平；从MCF-7细胞中提取总RNA，逆转录为cDNA，以cDNA为模板，扩增Bmi-1基因序列，将含有Bmi-1全长编码序列的PCR产物经TA克隆后经PCR、酶切验证，亚克隆入真核表达载体pcDNA3．1（＋）中，构建重组质粒pcDNA3．1（＋）-Bmi-1，转化至大肠杆菌后，酶切、测序鉴定；将重组质粒转染到MDA-MB-468中，48h后RT-PCR检测转染前后Bmi-1mRNA及hTERTmRNA的表达变化。结果：Bmi-1mRNA在MCF-7细胞中表达较高，而在MDA-MB-468细胞中仅适量表达。成功从MCF-7细胞中克隆获得Bmi-1基因并构建真核表达载体。转染后在MDA-MB-468中检测到Bmi-1mRNA表达上调，其过表达上调hTERTmRNA的表达。结论：成功克隆和建立人Bmi-1基因真核表达载体；pcDNA3．1（＋）-Bmi-1能在MDA-MB-468中表达；为进一步研究Bmi-1基因在细胞中的功能奠定了基础。