黑曲霉W3350脯氨酰内肽酶在大肠杆菌中的表达

摘要

目的:构建pET-PEP重组原核表达载体,并对表达产物进行鉴定。方法:采用RT-PCR技术从黑曲霉(Aspergillus niger)W3350中扩增出脯氨酰内肽酶(PEP)的基因,插入表达载体pET-22b(+),经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和DNA序列测定验证,将正确的重组质粒转入大肠杆茵BL21(DE3)中,IPTG(终浓度1mmol/L)诱导获得表达。结果:表达产物进行超声破碎,经SDS-PAGE电泳检测,PEP分子质量大约为57kDa,与理论值相符,通过酶活方法测定脯氨酰内肽酶酶活为0.656U/ml,约是出发菌株的5倍。结论:首次成功构建表达载体pET-PEP并在原核细胞中表达,为进一步研究PEP的生物学功能奠定了基础。