转基因轮状病毒疫苗植物表达载体的构建及GUS基因表达

摘要

目的　选用植物细胞表达轮状病毒结构蛋白 ,拟构建有效植物细胞表达系统。方法　利用PT -PCR扩增A组轮状病毒外壳蛋白VP4基因片段 ,经双酶切后与植物表达载体连接 ,转化感受态细菌TG1。利用地高辛标记探针进行斑点杂交检测 ,筛选出阳性克隆 ,拟用该克隆转化马铃薯细胞 ,研制新型轮状病毒疫苗。本研究还利用 β -葡萄糖苷酸酶 (GUS)基因转化马铃薯细胞。结果　A组轮状病毒SA11株VP4基因产物大小与设计相同 ,为 96 0bp。在被检测的未知载体中 ,有四个显紫色斑 ,可判定其为带有VP4cDNA的转化载体。用肉眼或显微镜可观察到马铃薯组织细胞中的蓝色物质。结论在转基因植物组织器官中观察到GUS的活性 ,获得外源基因转化的条件。拟用本研究构建的表达载体转化马铃薯细胞 ,研制新型轮状病毒疫苗。