RNAi沉默Sp3基因对裸鼠人肝癌种植瘤细胞侵袭能力的影响

摘要

目的:构建裸鼠人肝癌种植瘤模型,观察沉默特异性蛋白3(specificity protein 3,Sp3)对裸鼠人肝癌种植瘤侵袭能力的影响,并探讨其机制.方法:将Sp3 shRNA转染人肝癌HepG2细胞,并设无关序列阴性组及空白组为对照,建立3组裸鼠人肝癌种植瘤模型.观察裸鼠肿瘤的成瘤率,瘤体进行HE染色观察其病理学改变,采用Real-time PCR及免疫组织化学检测瘤组织中Sp3、β-连接素(β-catenin)、E-钙黏附蛋白(E-cadherin)及基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)mRNA和蛋白的表达情况.结果:实验组的成瘤率明显低于其他两组(60%vs 100%,100%);HE观察实验组肿瘤细胞侵袭能力明显降低.荧光定量PCR检测结果显示,种植瘤中实验组的Sp3、β-catenin及MMP-9 mRNA相对表达量明显低于空白组及阴性组,差异有统计学意义(F=29.692,P=0.001;F=21.894,P=0.002;F=109.414,P<0.001);实验组瘤体中E-cadherin mRNA的相对表达量高于其他两组(F=66.983,P<0.001).免疫组织化学结果显示,实验组Sp3蛋白表达为30±5.69、β-catenin蛋白表达为28±5.13、MMP-9蛋白表达为97±10.41均低于空白组及阴性组;E-cadherin蛋白表达为132±4.36明显高于其他两组,差异有统计学意义(P=0.000).结论:Sp3可通过上调β-catenin及其下游基因MMP-9表达,同时下调E-cadherin的表达,增强人肝癌细胞的侵袭能力.