能稳定表达外源抑癌基因PTEN的胆管癌细胞系QBC939的建立

摘要

目的为研究抑癌基因PTEN对胆管癌细胞生物学行为的影响,建立能稳定表达外源PTEN的胆管癌细胞系。方法将野生型、突变型PTEN质粒和空载体质粒分别转化细菌,提取纯化后,脂质体介导法转染体外培养的胆管癌细胞系QBC 9 3 9;嘌呤霉素筛选抗性克隆;W estern blot检测标签蛋白HA的表达;RT-PCR,W estern blot和免疫细胞化学法分析目的基因PTEN的表达。结果野生型、突变型PTEN和空载体转染细胞株均获得嘌呤霉素抗性;野生型和突变型PTEN转染细胞株均检测到HA的表达,而空载体转染细胞株和未转染细胞株均未检测到HA的表达;野生型及突变型PTEN转染细胞株中目的基因PTEN在mRNA和蛋白质表达水平上均较空载体转染细胞株和未转染细胞株增强。结论成功构建了分别能稳定表达外源野生型PTEN,突变型PTEN或空载体pBP的胆管癌细胞系。