恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域的克隆表达和抗原性分析

摘要

目的克隆、表达恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2(PF10_0355)的DBL2结构域,并分析其抗原性。方法 PCR扩增实验室培养的恶性疟原虫标准株3D7的基因组DNA,采用无缝克隆技术快速连接目的片段和质粒载体,构建重组表达质粒p ET28a-DBL2,转化至大肠埃希菌BL2l(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并经亲和层析获得纯化的重组蛋白r DBL2。分别以恶性疟患者血清、健康者血清、恶性疟患者混合血清和健康者混合血清作为一抗,蛋白质印迹(Western blotting)分析该重组蛋白的抗原性。结果 PCR扩增恶性疟原虫疫苗候选分子-裂殖子表膜蛋白MSPDBL2的DBL2基因,获得长约950 bp片段,与理论值相符。菌落PCR鉴定和测序结果均显示,重组质粒p ET28a-DBL2构建成功。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,经IPTG诱导并经亲和层析纯化后获得相对分子质量(Mr)约为34 000的包涵体蛋白。Western blotting分析结果显示,重组蛋白r DBL2可被恶性疟患者血清识别,而与健康者血清无特异反应。结论克隆和表达了恶性疟原虫裂殖子表膜蛋白MSPDBL2-DBL2结构域,重组蛋白r DBL2有良好的抗原性。