氧化应激诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡时NF-κB和Bak的表达变化

摘要

目的:探讨氧化应激状态下肺泡Ⅱ型(alveolar typeⅡ,ATⅡ)上皮细胞的凋亡情况及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65和Bak表达变化。方法:原代培养大鼠ATⅡ细胞,用过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)500μmol/L处理不同时间,建立氧化损伤性细胞模型。相差显微镜下观察细胞形态变化。流式细胞仪检测H2O2刺激后细胞凋亡率的变化。蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测ATⅡ细胞受H2O2刺激后NF-κB p65和Bak的表达变化。免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜下观察NF-κB p65的变化和细胞内分布情况。结果:受H2O2刺激3 h后,ATⅡ细胞体积减小,胞内颗粒数目减少,细胞核固缩。与正常对照组比较,受H2O2刺激1 h和3 h后,ATⅡ细胞的凋亡率明显上升(P=0.000,P=0.000)。Western blot检测发现H2O2刺激3 h后,细胞核内NF-κB p65的表达明显增加(P=0.000),ATⅡ细胞Bak蛋白的表达增加(P=0.000)。激光共聚焦显微镜观察发现正常细胞NF-κB p65表达微弱,H2O2刺激3 h后,NF-κB p65表达明显增强,主要集中分布于细胞核。结论:氧化应激能诱导ATⅡ细胞凋亡,在此过程中NF-κB p65在细胞核内的表达增加,Bak的表达也增加,两者参与了ATⅡ细胞的凋亡。