应用蛋白质工程法制备含硒单链抗体酶

摘要

目的 制备一种具有谷胱甘肽过氧化物酬（ＧＰＸ）活性的含硒单链抗体酶。方法 利用ＲＴ－ＰＣＲ方 法从杂交瘤细胞株２Ｆ３中扩增出单克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因。经ＤＮＡ序列测定后，构建成表达载体 ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ，经过金属螯合层析纯化、复性和化学诱变，得到含硒单链抗体酶。结果 将重组质粒ｐＴＭＦ－ｓｃＦｖ分别转 化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）、ＢＬ２１（ＤＥ３）和 ＢＬ２１（ｃｏｄｅｎ　ｐｌｕｓ），表达目的蛋白分别占菌体总蛋白的５％－１０％、１５％－ ２０％和 ２５％－３０％。该重组蛋白以包涵体形式存在，相对分子质量为３００００。其 ＧＰＸ活性为３４００Ｕ／μｍｏｌ，接近天 然酌水平。结论 为工业化制备含硒单链抗体酶奠定基础。