寿胎丸通过调控Nrf2信号通路减轻人绒毛膜滋养层细胞的氧化损伤治疗复发性流产

摘要

目的:研究寿胎丸含药血清通过核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对过氧化氢(H_(2)O_(2))损伤的人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/Svneo)的保护作用,并阐明其可能的机制。方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度的H_(2)O_(2)溶液(25、50、100、200、400μmol·L^(-1))对HTR-8/Svneo增殖的抑制作用,CCK-8法筛选含药血清的最佳浓度。将细胞分为空白组、模型组、地屈孕酮组、寿胎丸组,CCK-8法检测含药血清对H2O2诱导的HTR-8/Svneo细胞增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞内活性氧(ROS)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测核Nrf2、血红素加氧酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达;细胞免疫荧光检测Nrf2、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Nrf2、Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA的表达。结果:CCK-8法筛选H_(2)O_(2)最佳造模浓度为50μmol·L^(-1),含药血清的最佳体积分数为10%。与空白组比较,模型组细胞的增殖活力显著降低(P<0.01),细胞内ROS含量显著升高(P<0.01),Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),Caspase-3、Bax蛋白表达显著上升(P<0.01),Nrf2 mRNA表达显著降低(P<0.01),Caspase-3、Bax mRNA的表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,寿胎丸组细胞的增殖活力显著上升(P<0.01),细胞内ROS含量显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显上升(P<0.05,P<0.01),Caspase-3、Bax蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),Nrf2 mRNA表达明显升高(P<0.05),Caspase-3、Bax mRNA的表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:寿胎丸含药血清可以通过激活Nrf2信号通路来抑制H_(2)O_(2)诱导的细胞凋亡,对人绒毛膜滋养层细胞具有一定的保护作用。