人及禽类禽流感病毒蛋白芯片检测方法建立

摘要

目的建立可同时检测人及禽类禽流感病毒的蛋白芯片方法。方法采用醛基化玻璃载体蛋白芯片和双位点模式,将禽流感病毒H1、H3、H5、H7、H9、N1、N2、NP、NS1等9种亚型抗原以最佳浓度,点样于玻璃载体表面,构建相应抗体的检测芯片,分别用于禽类不同类型禽流感病毒血清及随机选择的人血清检测,并对特异性、敏感性及重复性进行测试,与血凝抑制法进行双向验证比较。结果探针H1、H3、H5、N1、N2、NP、NS1亚型抗原的最佳浓度为1 mg/mL,H7、H9亚型抗原最佳浓度为0.5 mg/mL;检测禽类禽流感病毒及人禽流感病毒使用的酶标抗体浓度分别为1∶1 000和1∶1 500;方法具有较好的特异性,对H7N7阳性血清的检测限为1∶40稀释度;重复性检测的变异系数均<2%;血凝抑制法和蛋白芯片法的检测结果一致。结论所建立的蛋白芯片法可用于人类和禽类禽流感病毒的检测。