基于改进的荧光原位杂交技术定位B型烟粉虱内共生菌Portiera和Wolbachia

摘要

【目的】共生菌Wolbachia在烟粉虱种群分化和物种形成中起重要作用。旨在采用荧光原位杂交技术,明确初生共生菌Portiera和次生共生菌Wolbachia在烟粉虱体内的分布。【方法】利用2种共生菌的特异性荧光探针对烟粉虱整虫进行荧光原位杂交,研究其在烟粉虱不同发育阶段的分布;在磷酸缓冲液中对烟粉虱成虫腹部进行组织解剖,利用优化的荧光原位杂交流程对获得的组织样本进行荧光染色、观察。【结果】对烟粉虱整虫进行荧光染色,在烟粉虱各个发育阶段虫体中均检测到Portiera和Wolbachia的荧光信号;在卵和若虫中,这2种共生菌集中分布于含菌细胞中,在成虫中,这2种共生菌所在的具体位置不清晰;成虫腹部组织染色结果显示,Portiera和Wolbachia除集中分布于含菌细胞中外,在卵巢中也有分布。【结论】利用本研究优化建立的昆虫组织染色方法,可以清晰观察烟粉虱成虫卵巢及含菌细胞中Portiera和Wolbachia的分布,可为其他昆虫及组织内共生菌的荧光染色观察提供参考。