农杆菌子房注射法对棉花的活体转化

摘要

采用根癌农杆菌直接注射子房,对8个棉花栽培品种进行活体方式的遗传转化.为了确立注射细菌的适宜时期,先采用含考马斯亮蓝染料的菌液对授粉前3d(-3 DPA,days post-anthesis)至授粉后2d(2DPA)的棉花子房进行注射,观察到细菌(染料)可以在-2 DPA至授粉后24h之间进入子房.为了避免注射对花柱的损伤并影响授粉,选取授粉后24h已完成受精的子房,利用微量注射器经花柱将10μL约含1000个细菌细胞的农杆菌菌液注入子房.对8个棉花品种转化结果表明,该方法可以有效转化棉花.种子成熟后田间播种,经卡那霉素抗性筛选及PCR(Polymerase chain reaction)分子检测,转基因效率平均为2.78%,转化效率与受体的基因型无明显的相关性,相对组织培养的农杆菌转化法和DNA子房注射法有一定的优势.