分离纯化重组水蛭素Ⅲ工艺的优化研究及重组水蛭素Ⅲ的分子鉴定(英文)

摘要

目的优化分离纯化大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的工艺并对所纯化产物进行分子鉴定。方法通过三步纯化步骤,即大孔树脂层析、DEAE纤维素DE52层析和反相高效液相色谱层析,分离纯化发酵液中的重组水蛭素Ⅲ,优化纯化条件。通过SDSPAGE和分析型反相高效液相色谱对重组水蛭素Ⅲ的纯度进行鉴定。以质谱对重组水蛭素Ⅲ的分子量进行鉴定。通过肽图的测定来鉴定重组水蛭素Ⅲ的结构。结果通过优化后的分离纯化步骤得到了纯度为95.4786%的纯品,总产率为39%。得到的产物分子量为6913.32±6.55Da,与重组水蛭素Ⅲ分子量的理论值相符,其结构亦与理论值一致。结论优化后的分离纯化步骤可以有效地用于大肠杆菌发酵液中重组水蛭素Ⅲ的大规模分离纯化。所得的高纯度产物确为基因重组水蛭素Ⅲ。