Exendin-4通过调控SIRT1/P53信号通路改善高糖作用下的内皮祖细胞功能障碍

摘要

目的研究Exendin-4对高糖诱导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能障碍的影响,并探讨沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)蛋白在其中的作用。方法采用密度梯度离心法分离并培养健康志愿者外周血EPCs,将不同浓度Exendin-4(12.5、50、100、200μmol·L-1)联合高糖(25 mmol·L-1)处理EPCs并检测其活力,选择药物的最佳作用浓度。将最佳浓度的Exendin-4与高糖共处理EPCs 72 h后检测其功能活性。通过迁移、黏附、小管形成实验检测EPCs功能;同时对乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平进行检测。使用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测TNF-α、IL-1β及IL-6 mRNA的表达。使用Western blot来检测SIRT1、p53和Ac-p53的蛋白表达。结果Exendin-4处理可明显改善高糖作用下EPCs的活力,尤以50μmol·L-1时作用效果最佳(P<0.05)。与高糖组相比,Exendin-4处理可上调SIRT1蛋白表达(P<0.05),增加高糖作用下EPCs的体外迁移、黏附、小管形成能力(P<0.05),并改善LDH及MDA水平(P<0.05),同时抑制TNF-α、IL-β及IL-6的mRNA表达(P<0.05)。而SIRT1受体抑制剂(EX-527)可使Exendin-4改善EPCs功能活性的作用受到明显的抑制(P<0.05)。另外,使用SIRT1激动剂(SRT1720)亦可改善高糖诱导的EPCs功能障碍(P<0.05)。结论Exendin-4可提高高糖作用下EPCs活力,改善EPCs功能,抑制氧化应激损伤,降低炎症因子表达,其机制可能与调控SIRT1/p53信号通路有关。