大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其用于肌腱损伤修复的前期研究

摘要

目的 探究大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其复合脂肪间充质干细胞构建微组织,为组织工程法修复肌腱损伤所需生物材料提供实验基础.方法 取 20 只 150 ～ 200 g SD 大鼠鼠尾作为实验材料,分别抽取出大鼠尾腱,经 PBS 彻底清洗后反复冻融 3 次,然后经过 1% SDS 于室温下处理 24 h,并用大量 PBS 清洗 1 周除去细胞残渣,最后 60Co 消毒备用.对制备的大鼠尾腱细胞外基质进行病理学染色,观察细胞残留情况.同时,检测该来源的生物源性材料残留 α-Gal 含量.此外,观察制备的大鼠尾腱细胞外基质复合脂肪间充质干细胞对细胞增殖的影响.同时,用 CCK-8 试剂盒检测该生物材料的细胞毒性.结果 大体观察可见,经脱细胞处理过的尾腱体积增大,呈乳白色匀浆状.HE 以及 DAPI 染色结果显示,经脱细胞处理后的尾腱细胞核大量减少,细胞数量显著降低,每个高倍镜视野内细胞残余量不大于 5 个.脱细胞尾腱残留α-Gal 含量与正常尾腱相比有统计学差异,脱细胞尾腱残留DNA 极少.复合脂肪间充质干细胞培养 7 d 相比培养 1 d活细胞数量明显增多.CCK-8 毒性测试结果显示这种脱细胞大鼠尾腱的生物相容性较好,没有细胞毒性.结论 经过脱细胞方法制备的大鼠尾腱细胞外基质可有效除去细胞成分,并且与脂肪间充质干细胞有较好的生物相容性,可作为一种生物材料用于肌腱损伤修复.