携带肝细胞生长因子基因重组质粒在大鼠体内的组织分布研究

摘要

目的 研究携带肝细胞生长因子基因的重组质粒(pUDKH)经肌肉注射给药后在大鼠体内的组织分布及其与大鼠基因组DNA的整合情况.方法 二级Wistar大鼠雌雄各20只,按体重和取样时间的不同随机分为12h、24 h、3 d、7 d、14d、21 d的各实验组(给予pUDKH,2.0mg/kg)和注射后3 d取样的对照组(给予PBS,200μl/只),依次将各组大鼠摘眼球取血后脱臼处死,按脑、心、肺、胸腺、肝、肠系膜淋巴结(MLN)、脾、肾、生殖腺、左腿肌肉、右腿肌肉的顺序取样.经典酚,氯仿抽提法提取各组织总DNA,应用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,PCR方法检测其中的β肌动蛋白基因;巢式PCR检测各组织总DNA中pUDKH的分布情况;ApaL I酶切分离pUDKH分布阳性各组织中的pUDKHDNA和基因组DNA,巢式PCR检测pUDKH DNA与基因组DNA的整合情况.结果 各组织总DNA浓度与纯度均符合实验需要,并适于采用PCR或巢式PCR方法进行体内组织分布及基因组DNA整合情况检测.巢式PCR检测显示,在各时间点的右腿肌肉与外周血、注射后3和7 d的肝脏、3和14 d的生殖腺、7 d的胸腺、7和14 d的MLN与左腿肌肉等组织中pUDKH分布均呈阳性,而在各时间点的脑、心、肺、脾、肾等组织中pUDKH分布均呈阴性.pUDKH分布阳性的各组织中均未检测到pUDKH DNA与基因组DNA的整合.结论 pUDKH经肌肉注射给药后,在各时间点大鼠体内各组织中呈现不同的分布谱.在pUDKH分布阳性的各组织中,pUDKH DNA与基因组DNA发生随机整合的概率较低.