旋毛虫成囊前期幼虫编码31 kDa抗原基因的分子克隆及序列分析

摘要

目的克隆旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码31kDa抗原基因(TspE1)片段,并测定其基因序列,以了解该基因序列与已报道虫株的差异.方法根据TspE1基因已知序列设计合成一对引物,采用RT-PCR技术获取旋毛虫成囊前期幼虫目的基因,PCR产物经纯化后用BamHⅠ、HindⅢ进行双酶切,定向克隆入pC18质粒,转化大肠杆菌JM109;重组质粒用BamHⅠ+HindⅢ酶切及PCR扩增鉴定.用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列测定,应用DNASIS软件进行同源性比较及预测抗原表位.结果 RT-PCR扩增获得成囊前期幼虫TspE1基因(约870bp),EcoRⅠ酶切鉴定正确;筛选出7个阳性克隆,对目的基因的测序结果显示有5种类型,但都与GenBank中的TspE1基因序列及由其推测的氨基酸序列有较高同源性,尤其是Ts-HN3核苷酸及氨基酸序列同源性分别达99.6%和98.9%;TspE1基因中可能存在7个抗原表位.结论应用RT-PCR技术扩增出旋毛虫河南株成囊前期幼虫编码31kDa抗原结构基因,证实TspE1基因在成囊前期幼虫已有表达;结果还提示在旋毛虫河南株之间可能存在有遗传多态性.