eha基因对迟缓爱德华菌抵抗巨噬细胞内外压力的影响

摘要

目的 E.tarda 能够在体内外许多环境包括在巨噬细胞内生存和繁殖,eha基因是该菌一个重要的转录调控基因,本研究探讨该基因在细菌抵抗巨噬细胞内外压力中的作用及机制.方法 采用体外实验模拟巨噬细胞内氧化和酸杀菌条件、体内血清和胆汁杀菌条件、以及细菌对SDS和多粘菌素B敏感性试验,比较ET-13毒力株及其Δeha缺失株和ehaComp互补株在这些压力下存活率,利用RT-PCR和SDS-PAGE电泳,比较上述3种细菌相关基因的转录和表达的差异.结果 eha基因的缺失使ET-13对酸、H2O2、SDS和多粘菌素B 敏感性提高(P<0.05);经小鼠血清或鱼胆汁处理后,3种菌株的存活率没有明显区别(P >0.05);RT-PCR结果显示,eha基因的缺失使得E.tarda内的超氧化物歧化酶基因sodC、过氧化氢酶基因katB和鞭毛蛋白基因fliC、Ⅲ型分泌系统分泌蛋白基因eseC的转录水平下降.SDS-PAGE电泳结果显示,缺失株的主要外膜蛋白比野生株表达降低.结论 eha 基因通过调控E.tarda相关基因的表达,参与了该菌抵抗巨噬细胞内氧化和酸等的压力,有助于细菌在巨噬细胞内生存和繁殖.