猪链球菌2型中国强毒株05ZYH33ofs基因敲除突变株构建及其生物学特性研究

摘要

目的 探究猪链球菌血清浑浊因子ofs基因在强致病性2 型猪链球菌致病过程中的作用.方法 利用同源重组基因敲除方法构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs编码基因上、下游同源序列的基因敲除质粒,将构建好的质粒电转化入猪链球菌感受态,同源重组筛选ofs基因敲除突变株,通过组合PCR、Southern杂交和DNA 测序对疑似突变株进行验证.生物学功能实验研究比较ofs突变株和野生株05ZYH33在革兰氏染色、菌落溶血活性、生长速率和毒力等方面的差异.结果 组合PCR、Southern杂交和DNA 测序结果均证实ofs基因敲除突变株05ZYH33 Δofs构建成功,体外实验结果显示ofs 基因缺失后菌株在革兰氏染色和菌落溶血活性及形态、生长速率等方面未发生改变,但小鼠毒力实验数据结果表明敲除突变株Δofs的毒力降低.结论猪链球菌2 型ofs基因与细菌的毒力相关,本实验构建的突变株05ZYH33 Δofs为进一步研究猪链球菌2型的致病机理奠定基础.