粉尘螨α-烯醇化酶基因的克隆表达、纯化及其N端B细胞表位的初步鉴定

摘要

目的 克隆表达粉尘螨(Dermatophagoidesfarinae)α-烯醇化酶(alpha-enolase,ENOA)基因,初步研究其N端B细胞表位与自身免疫性疾病的关系.方法 ①设计特异性引物,从文库中克隆ENOA cDNA;②通过BamH UEcoR Ⅰ双酶切位点,将ENOA基因克隆至pET-His原核表达载体,表达纯化,获得了重组ENOA蛋白;③测定重组ENOA酶活性;④通过Swiss-Model软件模拟ENOA蛋白3D结构,并分析其潜在的N端B细胞表位;合成ENOA的N端表位肽,测定其与类风湿性关节炎患者血清IgG的反应性.结果 ①克隆了ENOA全长cDNA(GenBank登录号KJ421213.1);②成功构建了pET-His-ENOA表达载体,经纯化获得了重组ENOA蛋白.③重组蛋白具有烯醇化酶活性;④瓜氨酸修饰的合成表位肽与类风湿性关节患者血清IgG-ELISA呈阳性反应,与健康对照组血清均不呈反应(P＜0.05).结论 本课题首次克隆表达的重组ENOA蛋白具有烯醇化酶活性;其N端B细胞表位与类风湿性关节炎相关.本研究为尘螨与自身免疫性疾病的相关性研究提供了新的思路.