北京鸭CD8α分子克隆与表达及其多克隆抗体制备

摘要

为了探讨鸭CTL免疫与病毒关系,本文用PCR技术从鸭cDNA文库中克隆了其CD8α基因(DuCD8α).将DuCD8α成熟肽cDNA插入表达载体pQE30、构建了E.coli JM109(pQE30/DuCD8α)原核表达系.经诱导表达、蛋白纯化,制备了鼠抗DuCD8α多克隆抗体.结果表明DuCD8α成熟肽长645 bp,编码214个氨基酸.与已报道的DuCD8α在氨基酸水平上的同源性高达99.0%.SDS-PAGE证实重组DuCD8α(rDuCD8α)在JM109工程菌中的表达量可达15%.纯化的rDuCD8α分子量为26 kDa.ELISA结果显示鼠抗rDuCD8α多克隆抗体效价为1:1 280 000.