猪源松鼠葡萄球菌脱皮毒素C抗体检测ELISA方法的建立与应用

摘要

本研究旨在建立一种简便、快速的检测猪源致病性由携带脱皮毒素(Exh)C的猪源松鼠葡萄球菌引起的猪渗出性皮炎抗体的间接ELISA方法.首先利用本实验室保存的致病性松鼠葡萄球菌rExhC重组蛋白和阳性血清,对ELISA各项反应条件进行摸索,确定了最佳工作条件.结果表明,rExhC蛋白抗原最佳包被浓度为0.5 μg/mL,血清的最佳稀释度为1:100,抗原抗体最佳反应条件为37℃,1h,酶标二抗最佳工作浓度为1:1 000,酶标二抗最佳反应条件为37℃30 min,封闭条件为5％脱脂乳37℃,2h,底物显色条件为室温30 min,阴阳性临界值为0.102.检测证实所建立的ELISA方法具有较好的特异性、敏感性和准确性.用所建立的ELISA方法检测了2011年在江苏省张家港市采集的335份猪血清样本,结果阳性率为31.94％,与公开发表的猪渗出性皮炎的阳性率相符.综上所述,本研究建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可用于猪源松鼠葡萄球菌引起的渗出性皮炎的检测.