大肠杆菌glgC基因的定点突变及高效表达

摘要

通过PCR方法,从E.coli JM109基因组DNA中扩增到全长为1 296 bp的glgC基因,对其进行定点突变,获得第296位和336位氨基酸同时突变的glgC336基因.将2者亚克隆进pET-30a,成功构建了重组表达载体pET-C和pET-C336,转化大肠杆菌BL21(DE3),在1 mmol/L IPTG诱导下进行表达.SDS-PAGE电泳分析显示,在约53 kD处有1条明显的蛋白表达带,证明目的基因已得到高效表达,且重组蛋白表达量占菌体蛋白总量的77.3%.