大鼠骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

摘要

背景：提供肝细胞生长因子的微环境可体外诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞。目的：实验拟验证并简化成年大鼠骨髓间充质干细胞体外向肝细胞的诱导分化。设计、时间及地点：观察实验，于2006-10／2008—05在北华大学完成。材料：实验动物为成年SD大鼠，雌雄不限，体质量180～230g。方法：采用Percoll梯度离心方法获取骨髓间充质干细胞，调整细胞密度为1×10^8L^-1加入含有20μg／L肝细胞生长因子培养液培养，定期更换培养液。主要观察指标：流式细胞仪检测细胞表面标志和碱性磷酸酶染色鉴定细胞类型。倒置显微镜连续观察细胞分化过程的形态学变化。培养的1，3，7，14，21，28d以细胞免疫组织化学检测细胞甲胎蛋白、细胞角蛋白18和清蛋白的表达。结果：接种后，细胞体积增大，形态多样贴壁细胞分化为体积较大的多角形和部分棱形，胞浆丰富，可见多核，接种早期细胞生长比接种晚期生长较快。分离纯化的SD大鼠骨髓间充质干细胞的表面标志为CD29^＋，CD44^＋，CD34^-，CD45^-和CD90^＋，细胞的碱性磷酸酶染色阴性，细胞纯度达98％以上。骨髓间充质干细胞的甲胎蛋白细胞免疫组织化学染色培养第7天即出现阳性，第14天清蛋白和细胞角蛋白18免疫组织化学染色阳性。结论：成年大鼠骨髓间充质干细胞在20μg／L肝细胞生长因子的诱导下，可分化为肝细胞。