靶向CD40小RNA干扰抑制大鼠异体肢体移植急性排斥反应后细胞凋亡及P53，P21，Bcl-2，Bax的表达

摘要

背景：对于CD40通路的研究以往多集中在器官移植，涉及异体肢体方面的报道较少。目的：探讨靶向CD40的小分子RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应、细胞凋亡的影响，检测CD40通路阻滞后相关基因的表达变化。设计、时间及地点：细胞基因工程体内实验，于2007—09／2008—02在哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室完成。材料：清洁级10～12周龄雄性Wistar受鼠、SD供鼠各27只，行同种异体右后肢移植。真核表达质粒pSilencer4．1-CMV neo为Ambion公司产品。pSilencer4．1-CD40shRNA重组质粒由哈尔滨医科大学附属第一医院中心实验室保存。梭华-Sofastr^TM in vivo体内转染试剂为厦门太阳马生物工程有限公司产品。方法：27只Wistar受鼠异体肢体移植完成后随机分为3组，9只／组。干扰组经阴茎背静脉注入梭华-Sofast（15 μL）-siCD40—2／pSilencer（100μg）载体复合物600μL，空载体组等量注入梭华-Sofast（15μL）-pSilencer4．1-CMV neo（100μg）空载体复合物，对照组等量注入生理盐水，连续注射6d，1次／d。主要观察指标：观察移植物排斥反应征象及移植肢体存活时间，检测细胞凋亡情况，免疫组织化学染色检测p53，p21，Bcl-2，Bax的表达。结果：干扰组未见排斥反应征象，且移植物发牛排斥反应的时间及存活时间均显著长于空载体组、对照组（t=3．137～3．519，P〈0．01）；空载体组、对照组于移植后近期发生排斥反应。干扰组移植后第1，3，5，7天细胞凋亡指数均明显低于空载体组、对照组（t=3．636-4．786，P〈0．01）。干扰组移植后各时间点P53，P21，Bax的表达均明显低于空载体组、对照组（t=3．586-4．531，P〈0．01）；Bcl-2的表达均明显高于空载体组、对照组（t=3．664—4．644，P〈0．01）。结论：在不应用免疫抑制剂的情况下，靶向CD40的小分子RNA干扰可以减轻大鼠异体肢体移植后的急性排斥损伤，抑制细胞凋亡，可能与其对p53，p21，bcl-2，bax基因的调节密切相关。