C3H10T 1/2小鼠胚胎成纤维细胞Dlxin 1基因表达及骨形态发生蛋白2的调控机制

摘要

背景:Dlxin1可与成骨相关转录因子Dlx、Msx家族成员相互作用调节其转录活性,骨形态发生蛋白2可诱导小鼠胚胎成纤维细胞(C3H10T1/2)向成骨细胞分化。目的:对C3H10T1/2小鼠胚胎成纤维细胞中Dlxin1基因的表达及骨形态发生蛋白2调控机制进行初探。设计、时间及地点:细胞分子水平实验,于2007-03/10在暨南大学生物工程研究所实验室完成。材料:C3H10T1/2细胞为ATCC产品,骨形态发生蛋白2为自产,DH5α为自备。方法:用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测骨形态发生蛋白2对基因表达的影响,用双荧光报告载体系统搜寻Dlxin1的上游启动子元件,用凝胶迁移实验(EMSA)对其精确定位。主要观察指标:①细胞中Dlxin1基因mRNA的表达情况。②pGL3-Dlxin1系列缺失突变报告载体荧光活性及启动子片段与C3H10T1/2细胞核蛋白的结合能力检测。结果:在转录水平上骨形态发生蛋白2可以诱导Dlxin1基因表达上调;Dlxin1启动子基础活性和骨形态发生蛋白2诱导活性调控区域均位于转录起始位点上游-943～-728bp之间;EMSA证实,-758～-748bp这一片段是调控核心区域。结论:转录因子通过与Dlxin1启动子上游TATAbox结合来调控Dlxin1基因的转录。