成人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的诱导分化：最佳诱导剂与诱导时间

摘要

背景:近年发现,骨髓间充质干细胞可以向神经细胞分化,但其最佳诱导剂及诱导分化时间尚无公论。目的:寻求一种将成人骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞的最佳诱导剂及诱导时间。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2007-10/2008-08在郑州大学第二附属医院完成。材料:取郑州大学医学院第二附属医院血液科穿刺的健康成人骨髓,性别不限。方法:将细胞转至24孔培养板中培养,将诱导剂脑源性神经营养因子(brain-derived nemotrophic factor,BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)配成质量浓度为20μg/L的溶液,维甲酸配成质量浓度为0.3mg/L的溶液,用加样器加入含DMEM、体积分数为2.5%胎牛血清的细胞中,诱导剂的最终浓度为2.5g/L,实验分为4组:GDNF+维甲酸组,BDNF+维甲酸组,GDNF+BDNF+维甲酸组,空白对照组(未加诱导剂)。主要观察指标:分别于诱导后12,24,48,96h后于倒置显微镜下观察各组细胞形状,并进行细胞计数,锥虫蓝检测细胞活力,并行免疫组织化学鉴定。结果:①诱导12h后,GDNF+维甲酸组有16.28%的细胞出现分化,其他3组未发现分化细胞,行免疫组织化学检测显示4组细胞胞浆均显示蓝色为阴性表现,即未有神经元样细胞出现。②诱导24h后,GDNF+维甲酸组有14.83%的细胞出现分化,BDNF+维甲酸组分化率为10.66%,GDNF+BDNF+维甲酸组为4.53%,空白对照组未发现分化细胞。免疫组织化学检测4组均为阴性。③诱导48h后,4组细胞分化率分别为(63.91±2.19)%,(23.15±3.00)%,(19.69±1.98)%,0,免疫组织化学检测结果GDNF+维甲酸组为阳性,即有神经元样细胞出现,其余3组均为阴性。④诱导96h后,4组细胞分化率分别为(51.29±3.75)%,(25.13±2.88)%,(23.61±1.94)%,0,免疫组织化学检测均为阴性。结论:实验中骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞的最佳诱导剂为GDNF+维甲酸,最佳诱导时间为48h。