兔抗凋亡诱导因子多克隆抗体的制备、纯化与鉴定

摘要

背景:凋亡诱导因子是存在于线粒体膜间隙中的黄素蛋白,它不仅具有氧化还原和电子传递功能,还具有促细胞凋亡功能,从而在维持细胞正常生理活动中具有重要作用。目的:制备抗凋亡诱导因子多克隆抗体并进行特性鉴定。设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2008-08在新乡医学院免疫学研究中心完成。材料:新西兰大白兔雌性2只,体质量1.9～2.1kg;JurkatE6-1细胞系购自美国ATCC公司。食管癌组织取自新乡医学院普通外科手术患者。抗原肽-KLH由上海华大天源生物科技公司合成。CNBr活化的Sepharose 4B购自美国Pharmacia公司。方法:利用美国过敏和感染疾病研究所(NIAID)主办的抗原表位分析网站(http://beta.immuneepitope.org/home.php)的在线软件对凋亡诱导因子蛋白的氨基酸序列进行分析设计凋亡诱导因子抗原肽,制备多克隆抗体并纯化。主要观察指标:采用间接ELISA、Western blot、免疫组织化学3种方法对获得的多克隆抗体进行特性鉴定。结果:间接ELISA法检测显示,血清抗凋亡诱导因子抗体的效价达到1∶128000。Western blot结果显示,存在Mr67000条带。免疫组织化学检测结果显示,在食管癌细胞的胞质中有棕黄色的阳性颗粒存在,说明此抗体也可以用于免疫组织化学染色。结论:实验获得了高效价的特异性的抗凋亡诱导因子抗体。